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肉牛人工授精具体标准化流程及其技术

1.人工授精概况

人工授精是以人工的方法利用器械采集雄性动物的精液,经检查与处理后,再输入到雌性动物生殖道内,达到妊娠的目的,以此来代替自然交配的一种妊娠控制技术。

我国的人工授精始于20世纪50年代,到70年代已经普及,普及率在90%以上。人工授精技术已成为肉牛高效快繁的重要手段,对提高我国肉牛繁殖速度、加快黄牛改良进程和提高肉牛业生产效率具有重大推动作用。

肉牛人工授精具体标准化流程及其技术

2.人工授精标准化技术程序

(1)授精前的准备。

①检精室。要求保持干净,室内陈设力求简单整洁,不得存放有刺激气味物品,禁止吸烟。室温应保持18~25℃。

②优质精液的采购。解冻后活力镜检达0.3以上,即可作为选购目标。

③冷冻精液的保管。为了保证储存于液氮罐中的冷冻精液品质,不致使精子活力下降,在储存及取用时应做到以下几点:

A.按照液氮罐保温性能的要求,定期添加液氮,罐内盛装储精袋(内装细管或颗粒)的提斗不得暴露在液氮面外。

B.从液氮罐取出精液时,提斗不得提出液氮罐口外,可将提斗置于罐颈下部,用长柄镊夹取精液,越快越好。

C.液氮罐应定期清洗,一般每年一次。要将储精提斗向另一超低温容器转移时,动作要快,储精提斗在空气中暴露的时间不得超过5秒。

(2)准确掌握输精适期。发情鉴定是肉牛配种的基础,生产上常规输精实行上午(早晨)发情下午输精,第二天早晨再输一次;下午(晚班)发情第二天早晨输精,然后下午(晚班)再输一次。

(3)人工授精的主要技术程序。目前的人工授精常用直肠把握输精法。

①准备。人工授精用的器材有精液运输时保存精液的设备、输精管或输精枪等。首先要将输精器具和母牛后躯清洗消毒,输精器具消毒常用恒温(160~170℃)干燥箱。开膣器等金属用具可冲洗后浸入消毒液中消毒或使用前酒精火焰消毒。输精器每牛每次1支,不得重复使用。使用带塑料外套细管输精器输精时,塑料外套应保持清洁,不被细菌污染,仅限使用1次。母牛外阴部清洗消毒可先用清水洗,接着用2%的来苏儿或0.1%的新洁尔灭消毒外阴部及周围,然后用生理盐水或凉开水冲洗,最后用消毒抹布擦干。另外可用酒精棉消毒阴门,待酒精挥发后再用卫生纸或毛巾擦干净。

其次是解冻精液,并镜检精子活力。目前常用精液制剂有两种:一种为细管型,另一种为颗粒型。细管冻精则可直接把细管放入40℃温水中进行解冻。而颗粒型精液解冻,通常把解冻用稀释液(1~1.5毫升2.9%的二水柠檬酸钠)安瓿置入40℃温水中,再放入冻精颗粒于稀释液安瓿中;解冻后应镜检精子活力,确认合格后方可置入输精管(枪)备用。精液解冻后应立即使用,不可久置。

②操作步骤。输精员清洗消毒手及手臂,涂上软皂,准备好输精器。将母牛拉进配种架,固定好头、尾,把母牛的外阴及尾根清洗干净、擦干。输精员一手五指合拢呈圆锥形,左右旋转,从肛门缓慢插入直肠,排净宿粪,寻找并把握住子宫颈口处,同时直肠内手臂稍向下压,阴门即可张开;另一手持输精器,把输精器尖端稍向上斜插入阴道4~5厘米,再稍向下方缓慢推进,左右手互相配合把输精器插入子宫颈,当输精器尖端到达子宫体分叉处时,即可挤出精液。输精完毕,稍按压母牛腰部,防止精液外流。在输精过程中如遇到阻力,不可将输精器硬推,可稍后退并转动输精器再缓慢前进。如遇有母牛努责时,一是助手用手掐母牛腰部,二是输精员可握着子宫颈向前推,以使阴道肌肉松弛,利于输精器插入。青年母牛子宫颈细小,离阴门较近;老龄母牛子宫颈粗大,子宫往往沉入腹腔,输精员应手握宫颈口处,以配合输精器插入。

输精完毕,将所用器械清洗消毒备用。

输精量一般1次1剂,若用2次复配法,则用2剂。如果能确定排卵时间,则可用1次配种法。

(4)母牛最佳配种时间的选择。

①育成牛最佳初配年龄的选择。一般情况下,育成母牛的体重要达到成年牛标准体重的70%以上时(本地牛达到300千克、杂交牛350千克以上),才能进行第1次配种。

②母牛产后适宜配种时间的选择。产后母牛的情期受胎率是随着产后时间而提高,一般情况下,母牛在产后50天左右即可达到正常的情期受胎率。

3.冷冻精液

(1)采精。采精的目的是每次最大量地获得高质量的精子。正确掌握采精技术,合理安排采精频率是保证采得多量优质精液和种公牛健康的重要条件。现在普遍应用的采精方法是假阴道法。

①采精场的准备。采精要在一定的环境下进行,以便公牛建立起固定的条件反射,同时也可防止精液污染。采精场应设在公牛舍和精液检查处理室附近,要求宽敞、平坦、安静、卫生,温度适宜,内设采精架以保定台牛,或设立假台牛供公牛爬跨进行采精。

②器材和设备的准备。采精用的主要有牛用假阴道、集精杯、假台牛等。精液处理用的恒温水浴箱、离心机等;精液质量检查用的显微镜、比色仪等;精液分装用的细管、分装机等;保存用的冷藏箱、冷冻设备、冷藏设备(如液氮和液氮罐)等。

③性刺激和性准备。在采精之前给待采公牛一定的性刺激(诱情)可增加每次射精中所含的精子数量。如让公牛靠近诱情母牛(假公牛)诱情,假爬跨或先假爬跨,然后进行几分钟诱情。维持公牛强烈性刺激可采取更换诱情母牛、改变诱情母牛的信号、提供两个诱情母牛、让诱情母牛或其他公牛爬跨待采公牛、采精场地再牵引入一头公牛、先采其他公牛后让待采公牛观看、避免分散公牛的注意力等方法。

④假阴道的准备。在生产中,多采用假阴道采精。10~15月龄的青年公牛,开采时应使用长20~24厘米直径5.1厘米的假阴道外筒。中等长度和直径的外筒应用于15月龄至3岁大的种公牛。假阴道的长度与阴茎的长度很好地对应。

⑤采精与采精频率。饲养员将公牛牵至台牛后面,采精员站在台牛右臀侧,右手持已准备好的假阴道,当公牛跳上台牛而阴茎未触及台牛前,用左手将阴茎导入假阴道内,射精后,将集精杯一端放低,待公牛滑下时,取下假阴道。到室内取下集精杯,以备进行精液品质检查。

(2)精液品质鉴定。精液品质评定的目的是鉴定精液质量的优劣,以便决定取舍和确定制作输精剂量的头份。

①外观和精液量。牛正常精液为乳白色或乳黄色。精液应该具有均匀、不透明的外观,表明其精子浓度高。半透明状的精液含的精子数较少。精子运动翻滚如云,俗称“云雾状”,云雾状越显著,表明精子活力、密度越好。

②精子活率。精子活率是指精液中前进运动精子所占有的百分率,也称为活力。评分法是用前进运动的精子数占总精子数的百分率来表示。测定方法是:在38~40℃下,用400倍显微镜进行观察,直线前进运动的精子占总精数90%(即0.9),80%(即0.8),以此类推。牛新鲜精液活率在0.4以上,冷冻精液解冻后在0.3以上才能用以受精。

③精子的密度。指单位容积(1毫升)的精液所含的精子数量。精子的浓度一般为8亿/毫升以上。当精子浓度在正常范围内时,其与受精力的关系不大。但当精子浓度下降到低于正常值的50%时,则应谨慎使用。

④精子形态检查。双尾、卷尾、断尾、双头、巨头等都属异常精子(畸形精子)。一般品质优良的精液,精于畸形率牛不得超过18%。如超过20%,可视为异常精液,应弃之不用。

除上述之外,牛精液品质评定尚有其他一些指标。如精子存活时间、精子对低温的耐受力、精子代谢活动等。

制作冻精的种公牛新鲜精液,应符合下列标准:色泽呈乳白稍带黄色、直线前进运动精子60%以上、每毫升精子数6亿以上和精子畸形率15%以下。

(3)精液的冷冻保存。精液的冷冻保存就是利用液氮(-196℃)、干冰(-79℃)或其他制冷设备为冷源,将精液经过特殊处理,保存在超低温下,以达到长期保存的目的。

①精液稀释液的配制。一份射精量为6毫升的公牛精液,其中含有的活精子数足够给200~300头母牛输精,但不可能把6毫升精液分成这么多份。精液稀释是指在精液中加入适宜于精子存活并保持受精能力的稀释液,其目的是扩大精液容量,提高一次射精量可配母牛头数,补充适量营养和保护物质,抑制精液中有害微生物活动,以延长精子的寿命,便于精液的保存和运输。

②精液的稀释、降温与平衡。精液应在镜检后(活率0.6以上,密度中等以上)尽快稀释,稀释前应将稀释液和被稀释的精液做等温处理(35℃左右),然后将稀释液缓缓倒入精液杯中,稀释后还应取一滴精液再检查活力情况,以验证稀释液是否有问题。稀释的倍数应根据原精液的活率和密度等确定,要求细管每个输精剂量应包含的呈直线前进运动的精子数为1000万个以上、颗粒1200万个以上、安瓿1500万个以上。

③冷冻。精液在冷冻前,应充分混匀,并检查精子活力。

A.细管型冷冻精液。采用一种聚氯乙烯塑料细管来容纳精液。细管型冻精的优点是标识、分装、冻结都可采用机械设备进行,且解冻后效果好于其他剂型,运输使用方便,易识别,不易污染。

B.颗粒型冷冻精液。没有包装容器,是把处理后精液直接滴冻成半球状颗粒的一种剂型,一个剂量一般为0.1毫升。缺点是不易标识,易受污染,优点是制作时不需复杂设备,占用储存空间很小,目前颗粒型冻精仍在部分地区生产和使用,但最终会被细管型冻精替代。

C.冻精活率检查。检查颗粒型冷冻精液时,将预先配制好的2.9%柠檬酸钠溶液1毫升,放于干净小试管中,置于40℃温水杯中,迅速取颗粒冷冻精液1粒放入试管,轻轻摇动至化冻时(约20秒),由水浴杯中取出,检查活率。对于细管冻精可以把细管直接放入40℃温水中解冻。不低于0.35即认为合格。在带有保温箱或保温台(35~38℃)的显微镜下进行活力检查。精子解冻后活率达0.35以上,直线运动精子数颗粒精液在1200万以上,细管精液在1000万以上方可输精。

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